琼脂糖核酸电泳操作步骤详解

　　琼脂糖核酸电泳操作步骤详解

　　1. ‌实验前准备‌

　　仪器检查‌：确认电泳仪电源、电压调节旋钮及电极连接正常，凝胶成像系统光源和软件功能完好‌。

　　试剂配制‌：

　　根据DNA片段大小选择琼脂糖浓度(0.5%-2%)，如大片段(>1kb)用0.5%-1%，小片段(<1kb)用1.5%-2%‌。

　　缓冲液常用TAE或TBE，需检查pH值(TAE为8.0，TBE为8.3)及是否变质‌。

　　安全防护‌：佩戴手套，避免接触溴化乙锭(EB)等致癌染料，推荐使用安全替代品(如GelRed)‌。

　　2. ‌凝胶制备‌

　　溶解琼脂糖‌：

　　称取琼脂糖干粉，按比例加入缓冲液(如1%凝胶：0.3g琼脂糖+30mL TAE)‌。

　　微波炉高火加热1-2分钟至溶解，避免沸腾溢出‌。

　　加染料与倒胶‌：

　　冷却至50-60℃后加入核酸染料(如EB替代物)，混匀‌。

　　缓慢倒入制胶模具，避免气泡，厚度3-5mm，静置30-45分钟凝固‌。

　　3. ‌电泳操作‌

　　安装凝胶‌：

　　凝固后轻拔梳子，将凝胶放入电泳槽，加入缓冲液至液面略高于胶面1mm‌。

　　上样‌：

　　样品与6×Loading Buffer按10:1混合，缓慢加入加样孔，避免穿破凝胶‌。

　　电泳参数‌：

　　电压60-100V，DNA由负极(黑色)向正极(红色)迁移‌。

　　大片段DNA(>2kb)建议5-8V/cm电压，避免高电压导致条带模糊‌。

　　4. ‌结果观察与分析‌

　　终止电泳‌：当溴酚蓝迁移至凝胶2/3处时停止‌。

　　成像检测‌：紫外灯或凝胶成像仪观察条带，与Marker对比判断DNA大小‌。

　　常见问题与优化

　　条带异常‌：可能因DNA构象(超螺旋/线性)或琼脂糖质量差异导致迁移率不同‌。

　　电压影响‌：高电压加速小片段迁移，但对大片段效果有限‌。

　　注：以上仅供参考，科研使用，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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