PCR扩增时用的Taq酶和Pfu酶有何区别?

　　PCR扩增时用的Taq酶和Pfu酶有何区别?

　　以下是Taq酶与Pfu酶(高保真酶)的核心区别及适用场景分析：

　　1. ‌保真度与错配率‌

　　Taq酶‌：无3'→5'外切酶活性(无校对功能)，错配率约10⁻⁴(每万碱基1个错误)‌。

　　Pfu酶‌：具备3'→5'外切酶活性(校对功能)，错配率低至10⁻⁶(每百万碱基1个错误)‌。

　　2. ‌产物末端特性‌

　　Taq酶‌：扩增产物3'端带A尾，适合TA克隆‌。

　　Pfu酶‌：产生平末端，需平端连接或特殊载体‌。

　　3. ‌扩增效率与速度‌

　　Taq酶‌：延伸速度快(1500-3000碱基/分钟)，适合常规PCR‌。

　　Pfu酶‌：因校对机制延伸较慢(约10-20碱基/秒)，但长片段扩增能力更强(可达5-19kb)‌。

　　4. ‌应用场景‌

　　Taq酶‌：基因分型、菌落PCR、TA克隆等对精度要求不高的场景‌。

　　Pfu酶‌：NGS建库、基因合成、定点突变等需高准确性的实验‌。

　　5. ‌热稳定性与成本‌

　　热稳定性‌：Pfu酶在95℃下半衰期比Taq酶高20倍‌。

　　成本‌：Pfu酶价格通常为Taq酶的2-3倍‌。

　　选择建议‌：若需快速扩增且允许一定错误率(如检测有无)，选Taq酶;若需精确序列(如克隆、测序)，优先Pfu酶‌。

　　注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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