ELISA实验中常见的误差来源有哪些?

　　ELISA实验中常见的误差来源有哪些?

　　ELISA实验中常见的误差来源可分为以下几类，天正信达结合了实验操作、样本处理及试剂环境等多方面因素：

　　一、操作因素

　　加样误差‌：移液器未校准、吸头未润洗或加样时触及孔壁，导致样品体积不准确或交叉污染‌。

　　孵育条件不当‌：温度不稳定、未覆盖板膜导致液体蒸发、叠放多块板子或孵育时间不足，均可能引起孔间浓度差异‌。

　　洗涤问题‌：冲洗不经反净会残留未结合物质(增高背景)，过度冲洗可能洗脱结合复合物(降低信号)‌。

　　二、样本因素

　　内源性干扰物质‌：

　　类风湿因子(RF)‌：与ELISA系统中的抗体结合，导致假阳性‌。

　　补体‌：激活后连接固相抗体和酶标二抗，造成假阳性或假阴性‌。

　　嗜异性抗体‌：与啮齿类动物Ig结合，干扰检测结果‌。

　　外源性干扰‌：

　　溶血‌：血红蛋白中的过氧化物酶催化显色反应，导致假阳性‌。

　　细菌污染‌：菌体内源性酶(如辣根过氧化物酶)引起非特异性显色‌。

　　抗凝剂干扰‌：肝素、EDTA等可能抑制酶活性或影响抗原抗体结合‌。

　　三、试剂与仪器因素

　　试剂问题‌：浓度不均、稀释不充分或批间差异，影响反应稳定性‌。

　　仪器误差‌：酶标板孔底厚度不均、光度计未校准，导致吸光度测量偏差‌。

　　四、环境与人为因素

　　系统误差‌：如方法固有缺陷、操作习惯差异(如加样速度、温控时间)‌。

　　随机误差‌：由未知可变因素引起，需通过重复实验减少。

　　总结‌：ELISA误差需从操作规范、样本质量控制、试剂选择及环境监测等多方面综合规避，尤其需注意加样精度和孵育条件的一致性‌。

　　注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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