ELISA试剂盒为什么要严格按照说明书操作

    ELISA试剂盒为什么要严格按照说明书操作

    每一个试剂盒里都会有对应的说明书，注意事项里大多都会提到“实验严格按照说明书的操作进行"。为什么要严格按照说明书操作?为了更完整的回答这个问题，需要先回顾一下ELISA各种方法的原理。

    根据试剂的来源和标本的性状及检测的具体条件，可设计出不同类型的检测方法。大致分为以下几类：

    1.双抗体夹心法测抗原;2.双抗原夹心法测抗体;3.竞争法测抗原;4.间接法测抗体

    elisa试剂盒检测方法

    回顾完原理，下面总结如果不按说明书操作可能会出现的不满意结果。

    1.先说严重的操作错误，看错或压根不看试剂盒配套说明书，不按操作步骤加样。比如把竞争法的试剂盒当作双抗体夹心法来做，导致的结果就是整板显示很强的蓝色，无任何梯度。

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    2.混用别的试剂盒里的试剂。不同厂家或者相同厂家的不同试剂盒，所含的试剂成分很可能是不一样的，混用导致的结果是，浪费珍贵的样本，样品的回收率达不到预期值，如果混用不同试剂盒的酶复合物，会导致显色过弱或过强，因为每种试剂盒所用酶复合物效价可能不一样。

    3.不看文献或者不做预实验。比如某个试剂盒按照其灵敏度范围和文献报道推算样本应该1:10稀释，结果稀释成1:1000，导致的结果是显色过弱，结果不可用。

    4.不校准移液器及培养箱的温度湿度。导致工作试剂浓度不准确，孵育温度不合适，实验带来误差。

    5.洗涤不充分，每孔洗液加样过少，或者残留。导致的结果是显色过快，同时背景较高。

    6.手洗板时所用枪头没有悬空加入洗液，导致洗液污染，整个实验失败。

    7.剩余酶标板条未及时放入干燥袋，导致酶标板受潮，下一次再做时，显色过弱或污染，CV值过高。

    8.试剂盒保存条件不当。试剂盒要求放4℃的，放在了-20℃。或者要求放-20℃的，放在了4℃。均会导致试剂盒敏感性下降。

    注：以上仅供参考！

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