人钙联蛋白(calnexin)ELISA试剂盒使用说明书

　　人钙联蛋白(calnexin)ELISA试剂盒使用说明书

　　人钙联蛋白(calnexin)ELISA试剂盒使用说明书‌的核心内容基于双抗体夹心法，用于定量检测人血清、血浆、细胞培养上清液等样本中的钙联蛋白(Calnexin)含量。以下是标准化操作流程与关键要点：

　　一、试剂盒基本信息‌

　　检测原理‌：双抗体夹心法

　　采用纯化的人钙联蛋白抗体包被微孔板，形成固相抗体，依次加入样本、HRP标记的检测抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，通过TMB显色反应测定OD值。

　　检测范围‌：具体以说明书为准，灵敏度通常低于 ‌1.0 ng/mL‌。

　　样本类型‌：血清、血浆、组织匀浆、细胞上清、细胞裂解液等生物液体。

　　保存条件‌：试剂盒于 ‌2–8℃‌ 保存，有效期 ‌6个月‌。

　　试剂盒组成‌(以96孔为例)：

　　酶标包被板 ×1

　　标准品 ×1瓶(0.5 mL)

　　标准品稀释液 ×1瓶(6 mL)

　　显色剂A液、B液 ×各6 mL

　　终止液 ×6 mL

　　浓缩洗涤液 ×1瓶(30倍浓缩)

　　封板膜、说明书、自封袋等

　　二、操作步骤‌

　　试剂准备‌

　　所有试剂从2–8℃取出后，室温平衡 ‌30分钟‌。

　　洗涤液：将30×浓缩洗涤液用蒸馏水稀释至1×工作液(如20 mL浓缩液 + 580 mL水)。

　　标准品稀释‌

　　初始标准品浓度为2700 ng/L，按倍比稀释法配制系列浓度(如2700、1350、675、337.5、168.75、84.38、42.19、0 ng/L)。

　　每孔加样100 μL，空白孔不加标准品。

　　加样与孵育‌

　　每孔加入 ‌100 μL标准品或待测样本‌。

　　37℃孵育1小时‌，确保抗原抗体充分结合。

　　洗涤‌

　　弃去孔内液体，每孔加入 ‌350 μL洗涤液‌，静置30秒，重复5次。

　　洗后拍干，避免残留影响背景值。

　　显色反应‌

　　每孔加入 ‌50 μL显色剂A液 + 50 μL显色剂B液‌。

　　37℃避光孵育15分钟‌，TMB在HRP催化下由无色变为蓝色。

　　终止与读数‌

　　每孔加入 ‌50 μL终止液‌，颜色由蓝转黄。

　　立即在450 nm波长下读取OD值‌，建议在终止后10分钟内完成。

　　数据分析‌

　　以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线。

　　使用线性回归方程计算样本浓度，再乘以稀释倍数得到实际浓度。

　　三、注意事项‌

　　避免使用含NaN₃的样本‌，因其抑制HRP酶活性。

　　样本应避免反复冻融‌，以防蛋白降解。

　　加样时更换枪头‌，防止交叉污染。

　　底物B液对光敏感‌，需避光保存和操作。

　　不同批号试剂不可混用‌，以免影响准确性。

　　注：本公司产品供科研实验，以上供参考!

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