Elisa试剂盒样本检测步骤

Elisa试剂盒样本检测步骤

ELISA试剂盒样本检测的核心步骤‌包括加样、温育、洗涤、显色和读数，具体流程依据试剂盒类型（如双抗体夹心法、竞争法等）略有差异，但基本遵循标准化操作。

标准操作流程

加样‌

将待测样本（如血清、血浆）和标准品按说明书要求加入已包被抗体的微孔板中，每孔‌100 μL‌，注意更换枪头避免交叉污染。

空白孔不加样本，仅加稀释液作为对照。

温育‌

用封板膜封闭反应孔，置于‌37℃恒温培养箱‌中孵育‌60–90分钟‌，使抗原与固相抗体充分结合。

温育期间避免震动，确保反应环境稳定。

洗涤‌

孵育结束后，甩尽孔内液体，使用洗涤液（如PBS缓冲液）‌清洗3–5次‌，每次浸泡30秒，去除未结合物质。

洗涤不充分会导致背景值升高，影响结果准确性。

加酶标试剂‌

每孔加入‌100 μL酶标二抗‌（如HRP标记的检测抗体），覆盖后再次于37℃孵育‌30–60分钟‌。

酶标试剂需现配现用，避免活性下降。

再次洗涤‌

重复上述洗涤步骤，清除未结合的酶标抗体，减少非特异性信号。

加底物显色‌

加入‌TMB等显色底物溶液‌（约100 μL/孔），避光孵育‌15–20分钟‌，观察颜色变化。

显色时间需严格控制，防止过度反应。

终止反应‌

加入‌50 μL终止液‌（如硫酸溶液），使反应终止，溶液由蓝色变为黄色。

加终止液后应在‌5分钟内‌完成读数，避免光密度值漂移。

读数与分析‌

使用酶标仪在‌450 nm波长‌下测定各孔吸光度（OD值），必要时以630 nm或570 nm进行校正。

根据标准曲线计算样本中目标抗原或抗体的浓度。

注：本公司产品供科研实验，以上供参考！

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