大鼠凋亡诱导因子(AIF)ELISA试剂盒操作步骤

   大鼠凋亡诱导因子(AIF)ELISA试剂盒

   货号：BS-2877

   名称：大鼠凋亡诱导因子(AIF)ELISA试剂盒

   规格：96T/48T

   基本信息：

   检测原理‌：主流采用‌双抗体夹心法‌检测，预包被AIF特异性抗体，样本中AIF结合后，再加入HRP标记检测抗体形成复合物，通过TMB显色定量，产物颜色深浅与AIF浓度正相关。

   适用样本‌：大鼠血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清、细胞裂解液。

   核心性能（通用标准）‌：检测范围通常为0.1ng/mL-8ng/mL，低检测限≤0.05ng/mL；板内变异系数CV<10%，板间CV<15%，特异性不与其他凋亡相关蛋白交叉反应。

   操作步骤：

   实验前准备‌：试剂盒从2-8℃取出，室温平衡30分钟；20×浓缩洗涤液按1:19比例用蒸馏水稀释；冻干标准品复溶后做倍比稀释，得到5-7个梯度浓度。

   加样孵育‌：设置空白、标准品、待测样本孔，标准品孔加50μL对应浓度标准品，待测样本孔先加40μL稀释液再加10μL样本（稀释倍数5倍），封板后37℃孵育60分钟。

   洗涤加酶‌：洗涤5次拍干后，除空白孔每孔加100μLHRP标记检测抗体，重新封板37℃孵育60分钟，再次洗涤5次拍干。

   显色读数‌：每孔依次加50μL显色剂A、50μL显色剂B，37℃避光显色15分钟，加50μL终止液终止，15分钟内用酶标仪450nm波长读数。

   结果计算‌：四参数拟合标准曲线，根据样本OD值查出浓度后乘以稀释倍数，得到终AIF实际浓度。

   使用注意事项：

   选型时优先选择‌双单抗配对‌的试剂盒，特异性更好，能降低非特异性结合导致的背景偏高问题；若检测细胞样本，需确认产品标注支持细胞裂解液检测。

   大鼠组织样本需要提前预处理：组织块匀浆后离心取上清，去除碎片沉淀后再检测，避免堵孔或干扰显色。

   实验必须设置复孔和阴阳性对照，若标准曲线线性R²＜0.98，需要排除标准品降解或操作误差，重新实验。

   注：以上科研产品资料供参考!

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