elisa试剂盒样样本收集方法

　　elisa试剂盒样样本收集方法

　　ELISA检测的样本收集需要根据样本类型做差异化处理，核心要求是去除杂质、避免蛋白降解，保证检测结果准确，以下是不同类型样本的标准收集方法：

　　一、液体样本收集方法

　　1. 血清

　　用无热原无菌试管采集静脉血，室温放置10分钟~2小时自然凝固(低温环境可4℃静置过夜)，2-8℃条件下以5000-6000转/分钟离心5分钟，仔细收集上清后立即检测;若需保存，分装后置于-20℃或-80℃冷冻，严禁反复冻融。

　　注意：收集过程需避免溶血和细菌污染，否则会导致非特异性显色，出现假阳性结果。

　　2. 血浆

　　根据试剂盒要求选择EDTA、肝素钠或柠檬酸钠作为抗凝剂，采集血液后30分钟内轻轻混合均匀，2-8℃、5000-6000转/分钟离心5分钟，收集上清后立即检测或分装冻存。

　　注意：检测前需核对试剂盒说明书，部分试剂盒对抗凝剂有特殊要求。

　　3. 尿液/脑脊液/细胞培养上清

　　尿液：用无菌管收集新鲜中段尿，2-8℃、5000-6000转/分钟离心5分钟，取上清检测或冻存，出现沉淀需再次离心;

　　脑脊液：腰椎穿刺无菌采集后，相同条件离心取上清，避免混入血液污染;

　　细胞培养上清(检测分泌蛋白)：无菌收集上清，离心去除细胞碎片后即可检测，冻存要求同血清。

　　二、固体/组织样本收集方法

　　1. 组织匀浆

　　切割新鲜组织标本，称取1g组织后加入9ml pH7.2-7.4的预冷PBS，手工或用匀浆器充分匀浆(植物组织需在液氮中研磨)，2-8℃、5000-6000转/分钟离心5分钟，收集上清分装，一份待测其余冻存。

　　2. 细胞内蛋白样本

　　悬浮细胞‌：4℃下1000-2000×g离心10分钟收集细胞，按10⁶个细胞加300-500μL匀浆介质的比例添加试剂，机械破碎后离心取上清;

　　贴壁细胞‌：吸去培养液后用PBS清洗，细胞刮刮下细胞收集悬液，后续处理和悬浮细胞一致;

　　处理推荐用物理破碎(反复冻融、超声)，避免化学裂解液引入杂质干扰检测，若必须用化学法，需透析去除去污剂后再检测。

　　三、通用保存要求

　　样本需澄清透明，必须离心去除沉淀物或悬浮物，ELISA仅能检测可溶性蛋白，杂质会干扰结果;

　　-20℃或-80℃保存的样本需在1-6个月内完成检测，4℃保存的样本需在1周内检测，避免蛋白降解;

　　所有样本都需要分装保存，严禁反复冻融，冻存样本检测前需缓慢恢复至室温，禁止加热融解。

　　注：以上科研产品资料供参考!

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