科研白介素Elisa试剂盒的实验步骤
白介素ELISA试剂盒采用双抗体夹心法完成检测,核心实验步骤如下:
实验前准备
将试剂盒从2-8℃环境取出,室温平衡15-30分钟,浓缩洗涤液若有结晶可37℃水浴助溶,同时完成样本预处理,避免样本含NaN₃抑制HRP酶活性。
加样与孵育
设置标准品孔、样本孔和空白孔,标准品孔加入梯度稀释的标准品,样本孔按要求加入稀释后的待测样本,每孔加样量控制在50-100μL,整板加样时间不超过5分钟,随后加入HRP标记的检测抗体,封板后37℃温育30-60分钟。
洗板操作
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液,静置30秒后甩干,重复洗板5-6次,最后在吸水纸上拍干孔内残留液体,避免背景升高出现“花板"。
显色与终止
每孔依次加入显色液A、B,37℃避光孵育15分钟,待孔内液体变为明显蓝色后,加入终止液,液体将转为黄色。
读数与结果计算
终止反应后15分钟内,用酶标仪在450nm波长下测定各孔OD值,通过标准曲线回归方程计算样本中白介素的浓度,稀释过的样本需乘以对应稀释倍数。
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