ELISA实验中缓冲溶液等试剂的配置

　　ELISA实验中缓冲溶液等试剂的配置

　　一、常用试剂配制方法

　　包被缓冲液(0.05mol/L pH9.6 碳酸盐缓冲液)‌

　　称取Na₂CO₃ 1.59g、NaHCO₃ 2.93g，加蒸馏水溶解并定容至1000mL，调pH至9.6，4℃保存一周内用完。

　　洗涤缓冲液(pH7.4 PBS-T)‌

　　称取NaCl 8.0g、KCl 0.2g、Na₂HPO₄·12H₂O 3.58g、KH₂PO₄ 0.27g，加蒸馏水溶解，加入0.5mL Tween-20，定容至1000mL，调pH至7.4，室温保存。

　　样本/抗体稀释液‌

　　含1% BSA的PBS缓冲液：1g BSA溶于100mL pH7.4的PBS中，4℃保存，避免样本变性、减少非特异性吸附。

　　封闭液‌

　　可选1%~5% BSA-PBS或5%脱脂奶粉-PBS，现配现用，覆盖酶标板未结合位点。

　　底物缓冲液(pH5.0 柠檬酸-磷酸缓冲液)‌

　　A液：0.1mol/L柠檬酸21.01g定容至1000mL;B液：0.2mol/L Na₂HPO₄·12H₂O 71.63g定容至1000mL。取A液24.3mL、B液25.7mL混合，加蒸馏水定容至100mL，调pH至5.0。

　　TMB显色工作液‌

　　取底物缓冲液9.9mL，加入1% TMB无水乙醇溶液0.1mL，再加入30% H₂O₂ 10μL，临用前配制、避光操作。

　　终止液(2mol/L H₂SO₄)‌

　　量取178.3mL蒸馏水，缓慢逐滴加入21.7mL 98%浓硫酸，搅拌冷却后使用。

　　二、通用配制注意事项

　　试剂纯度‌：使用分析纯试剂和去离子水，避免杂质干扰反应体系。

　　pH控制‌：精准校准pH计，严格将各缓冲液pH控制在指定范围，保障抗原抗体结合效率。

　　混匀操作‌：配制过程充分搅拌，避免局部浓度偏差，做好配制记录便于实验溯源。

　　储存要求‌：多数缓冲液2~8℃冷藏，TMB显色液、含脱脂奶粉的试剂需现配现用，防止变质污染。

　　安全操作‌：配制浓硫酸终止液时需将酸缓慢倒入水中，严禁反向操作，做好个人防护。

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