ELISA实验中客户最常遇到的各类实操与结果异常问题

　　ELISA实验中客户最常遇到的各类实操与结果异常问题

　　针对ELISA实验中客户最常遇到的各类实操与结果异常问题，天正信达整理了覆盖全流程的排查方案，帮你解决问题。

　　样本处理类常见问题

　　RIPA裂解液样本能否直接用于检测‌：可以直接检测，但需将裂解液稀释至少10倍，把SDS浓度降至≤0.01%，避免高浓度去污剂破坏抗体结合体系。

　　样本保存后结果偏差大‌：样本取材后需立即分装，-20℃或-70℃冻存，‌绝对避免反复冻融‌;当天检测的样本4℃暂存，长期保存需添加足量蛋白酶抑制剂。

　　血清/血浆样本出现假阳性‌：样本分离不净、残留纤维蛋白或溶血会直接干扰结果，采血后需静置1~2小时，3000rpm离心15分钟再取上清检测。

　　标准曲线异常问题

　　标准曲线A450值远低于说明书示例‌：大概率是标准品溶解操作不规范，必须用试剂盒自带的标准稀释剂复溶，冰上静置5~10分钟充分混匀，禁止用超纯水直接溶解。

　　标准曲线线性差、R²不足0.98‌：倍比稀释时蛋白吸附在普通EP管壁上，需使用硅化EP管操作;若出现奇异点，改用四参数曲线拟合替代简单线性拟合。

　　标准品反复冻融后失效‌：复溶后的标准品需按单次使用量分装，-20℃冻存，每次实验取1支新的使用，避免反复冻融导致蛋白降解。

　　操作环节高频问题

　　洗板后背景异常偏高‌：洗板时洗液溢出孔外，高浓度孔污染空白孔是最常见原因;手工洗板甩板动作要干脆迅速，用干净滤纸拍干，禁止用卫生纸擦拭孔底。

　　整板几乎无显色(白板)‌：优先排查是否漏加酶结合物、TMB底物是否失活，可单独取少量酶液加入TMB，若不显色直接更换底物试剂。

　　实验重复性差、孔间CV值超标‌：移液器需定期校准，加样时枪头不要贴壁，避免液体挂在孔壁非包被区;加样顺序从低浓度到高浓度，每个浓度更换新吸头。

　　孵育后孔内液体蒸发严重‌：必须使用全新封板膜密封板孔，孵育箱温度稳定在37℃，禁止频繁开箱，避免局部温度不均导致液体蒸发。

　　结果异常类问题

　　样本检测值低于空白孔‌：低丰度靶标接近试剂盒检出限会出现该现象，大量样本出现该情况是基质效应导致，可将样本适度稀释，或用含10%~50%同源血清的PBS配制校正曲线修正。

　　全板背景值过高‌：洗板不净、酶结合物被污染、封闭时间不足是三大主因;可增加2次洗板次数，延长封闭时间至1.5小时，避免不同批次试剂混用。

　　显色后颜色深浅不均‌：洗板完成后需立即加入TMB底物，全程避光操作，从加第一孔开始精确计时，保证所有孔的显色时间一致。

　　试剂耗材类特殊问题

　　试剂盒内链霉亲和素-HRP用完能否单独补购‌：原厂同批次的偶联物不单独售卖，可选购同级别ELISA链霉亲和素-HRP，但必须重新预实验确定最佳稀释比例，不能直接沿用原说明书参数。

　　无缓冲液的抗体对试剂盒如何运行‌：需单独购买配套的缓冲液试剂盒，其中5X检测缓冲液可同时完成封闭、标准品和样本稀释的双重作用，不能用普通PBS替代。

　　注：以上科研产品资料供参考!

　　适应客户：医院检验科PCR实验室，中心实验室，肝病中心;第三方检测机构，科研院所，大专院校，制药厂，试剂生产厂家，疾控中心，检验检疫。

　　天津天正信达供应：RNA逆转录试剂盒、逆转录试剂盒、PCR试剂盒、提取试剂盒、色谱进样瓶、培养基瓶、试剂瓶、胎牛血清、染色液、试剂瓶、QPCR试剂盒、生物试剂、抗体、琼脂糖、实验耗材，开云在线登录拥有一支覆盖生物化学、分子生物学、免疫学等专业人员的研发、构建了仪器设备齐全的实验技术平台，主要包括AKTA、高压均质机、全波长酶标仪、高速落地离心机和qPCR仪等大型仪器设备。