以下是关人γ干扰素诱导蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA试剂盒的实验使用说明,综合整理自不同来源的可靠信息: BS-0383人γ干扰素诱导蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA试剂盒 一、实验原理 该试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术: 将捕获抗体包被于微孔板上,结合样品或标准品中的待测物IFI16p16。 加入生物素标记的检测抗体,形成“捕获抗体-抗原-检测抗体"复合物。 通过链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶(HRP)催化底物TMB显色,颜色深浅与待测物浓度成正比,终通过酶标仪测定吸光度(OD值)计算浓度。 二、试剂盒组成与储存 主要组分: 包被抗体、检测抗体、标准品、HRP标记物、显色液(TMB)、终止液等。 储存条件: 未开封试剂盒需2-8℃避光保存;部分组分(如显色液)需严格避光。 有效期:通常为6个月,具体以标签为准。 三、样品处理要求 血清/血浆: 采集后室温静置2小时或4℃过夜,1000×g离心20分钟,取上清保存于-20℃(避免反复冻融)。 组织匀浆: 用预冷PBS冲洗组织,按1:9(重量体积比)匀浆,离心取上清。 注意事项: 避免溶血、高血脂或含NaN3的样本(NaN3抑制HRP活性)。 四、操作步骤 试剂准备: 标准品需现用现配,不可保存;洗涤液按1:50稀释。 加样与孵育: 依次加入标准品/样品、检测抗体、HRP标记物,每步需充分洗涤。 显色与读数: 加入TMB显色10-30分钟,终止液终止反应后,立即用450nm波长测OD值。 五、注意事项 安全防护: 避免接触终止液和底物(有毒),操作时戴手套,勿用嘴吸取试剂。 实验细节: 加样顺序一致,避免气泡;洗涤需拍干;显色液避光保存。 质量控制: 每个标准品和样品建议做复孔;超出检测范围需稀释后重测。 六、常见问题 显色异常:若孔内呈绿色,表明终止液未混匀。 数据偏差:可能由样本处理、试剂批次或仪器误差引起,需重复实验验证。 注:以上资料仅供参考,如需更详细的操作图示或标准曲线绘制方法,可参考试剂盒附带的说明书或联系供应商获取技术支持。 |