大鼠白介素12(IL-12P70)ELISA试剂盒实验说明书 一、试剂盒组成 预包被抗体的96孔板(进口高亲和力抗体) 重组冻干标准品(需按说明书复溶) 生物素化检测抗体(避光保存) 链霉亲和素-HRP复合物(ABC稀释液配制) TMB显色液与终止液(含硫酸) 样本稀释液(含稳定剂) 洗涤缓冲液(20×浓缩液) 二、检测原理 采用双抗体夹心法： 固相抗体捕获样本中的IL-12 p70 生物素化抗体结合目标抗原 链霉亲和素-HRP催化TMB显色 450nm波长读值(参考波长540/570nm) 三、操作流程 样本处理 血清/血浆：避免溶血，4℃短期保存，-80℃长期保存 细胞上清：离心去除颗粒物，建议新鲜检测 实验步骤 标准品梯度稀释(建议7点浓度) 每孔加样100μL(标准品/样本/空白) 37℃孵育90分钟 洗涤3次(每次拍干) 加检测抗体(100μL/孔)，37℃孵育60分钟 加ABC复合物(100μL/孔)，避光孵育30分钟 显色15分钟(避光)，加终止液终止反应 四、关键参数 项目参数 灵敏度7-14.2pg/mL(不同品牌差异) 检测范围15.6-1000pg/mL(线性区间) 重复性板内/板间CV<10% 交叉反应不与IL-6、G-CSF等混淆 五、注意事项 所有试剂使用前需平衡至室温(25℃) 显色反应需严格控制时间(±30秒) 终止液含腐蚀性成分，需佩戴防护装备 建议每次实验建立新标准曲线 异常值需复测(建议n=3) 六、结果计算 以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制曲线 四参数逻辑回归拟合 样本浓度=拟合方程计算值×稀释倍数 七、性能验证 回收率测试：建议加标回收率85%-115% 稳定性评估：开封后试剂需2-8℃避光保存 注：仅供科研使用，以上资料供参考，如需具体产品说明请咨询技术老师或品牌供应商。 | 
