pcr高保真酶和普通taq酶区别
以下是高保真酶与普通Taq酶的核心区别及适用场景分析:
1. 保真度与错配率
高保真酶(如Pfu、Q5):具备3'→5'外切酶活性(校对功能),错配率低至10⁻⁶(每百万碱基1个错误)。
普通Taq酶:无校对功能,错配率约10⁻⁴(每万碱基1个错误)。
2. 产物末端特性
Taq酶:扩增产物3'端带A尾,适合TA克隆。
高保真酶:产生平末端,需平端连接或特殊载体。
3. 扩增效率与速度
Taq酶:延伸速度快(1500-3000碱基/分钟),适合常规PCR。
高保真酶:因校对机制延伸较慢(如Pfu约10-20碱基/秒),但长片段扩增能力更强(可达13kb)。
4. 应用场景
Taq酶:基因分型、菌落PCR、TA克隆等对精度要求不高的场景。
高保真酶:NGS建库、基因合成、定点突变等需高准确性的实验。
5. 成本与热稳定性
成本:高保真酶价格通常为Taq酶的2-3倍。
热稳定性:部分高保真酶(如ProofStart)在95℃下半衰期达4小时,优于普通Taq酶。
选择建议:若需快速扩增且允许一定错误率(如检测有无),选Taq酶;若需精确序列(如克隆、测序),优先高保真酶。
注:以上仅供参考,不作为实际数据,实验需严格遵循说明或咨询技术老师。
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