如何判断ELISA实验是否成功?
ELISA实验成功的判断需结合阴性/阳性对照有效性、标准曲线质量及样本结果可靠性,具体标准如下:
1. 对照有效性验证
阴性对照:OD值应接近空白孔(通常≤0.1),且无假阳性信号。
阳性对照:OD值需显著高于Cut-off值(如P/N比值≥2),证明试剂活性正常。
Cut-off值判定:样本OD值≥阴性对照均值+2~3SD(或按试剂说明书阈值)判为阳性。
2. 标准曲线质量
线性范围:R²≥0.99,且样本OD值落在标准曲线线性区间内。
梯度合理性:标准品OD值应随浓度递增呈规律性变化,无跳孔或异常波动。
3. 样本结果可靠性
重复性:同一样本重复孔间OD值差异应<20%。
信号强度:样本OD值需显著高于阴性对照(竞争法则相反),若信号过弱需复测或调整样本浓度。
4. 常见失败原因
假阳性/阴性:洗涤不净、封闭不足或抗体交叉反应。
曲线异常:标准品失效、孵育时间不足或酶标板污染。
5. 结果表示方法
定性:阴阳性判定(如OD值>Cut-off值)。
定量:通过标准曲线计算浓度,需标注稀释倍数。
若需进一步优化实验,可参考:ELISA实验操作视频。
注:以上仅供参考,不作为实际数据,实验需严格遵循说明或咨询技术老师。
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